异甘草素通过细胞周期蛋白依赖性激酶独立机制诱导人膀胱癌T24细胞凋亡。
摘要来源：Oncol Lett。 2017 年 7 月；14(1):241-249。 Epub 2017 年 5 月 12 日。PMID：28693160
摘要作者：司玲玲、杨新辉、严新艳、王彦明、郑秋生
文章单位：司玲玲
摘要：本研究旨在探讨细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）活性的增加是否与细胞周期蛋白诱导的人膀胱癌T24细胞凋亡有关。异甘草素（ISL）。使用磺胺罗丹明 B 测定法评估 T24 细胞的活力。使用 Hoechst 33258 染色检查细胞形态变化。细胞凋亡r通过用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素和碘化丙啶标记对细胞进行染色来测定ate。使用5,5,6,6-四氯-1,1,3,3-四乙基苯并咪唑羰花青碘化物测量线粒体膜电位（ΔΨm）。凋亡相关调节因子 B 细胞淋巴瘤-2 (Bcl-2)、Bcl-2 相关 X 蛋白 (Bax)、Bcl-2 相互作用细胞死亡介质 (Bim)、凋亡蛋白酶激活因子 1 的改变(Apaf-1)、caspase-9 和 caspase-3 采用逆转录聚合酶链式反应 (PCR) 和定量 PCR 方法进行测定。 Western blot分析检测Bcl-2、Bax、caspase-3的表达。使用光谱测定法测量CDK2活性。用ISL（30至70μg/ml）处理24小时后，在T24细胞中观察到典型的凋亡形态学变化，表现出染色体边缘集、核固缩、核碎裂和其他形态学特征。增加 ISL 治疗以浓度依赖性方式增加T24细胞的凋亡率，并以时间依赖性方式诱导ΔΨm减少。 ISL处理上调Bax、Bim、Apaf-1、caspase-9和caspase-3的表达，下调Bcl-2的表达，并增加CDK2活性。 MK-8776（CDK2抑制剂）拮抗ISL诱导的细胞凋亡，与单独ISL治疗相比，MK-8776预处理抑制ΔΨm的减少，下调Bax、Bim、Apaf-1、caspase的mRNA表达-9 和 caspase-3，并上调 Bcl-2 mRNA 表达。 Western blot分析显示，随着ISL浓度的增加，Bcl-2表达水平显着降低（P<0.05），而caspase-3和Bax表达水平显着升高（P<0.01）。这些结果表明ISL处理引起T24细胞的增殖率显着降低和凋亡增加。 ISL诱导T24细胞凋亡的机制体外凋亡可能与 CDK2 活性增加、ΔΨm 下调以及 caspase-3/caspase-9 介导的线粒体凋亡信号通路激活有关。