[葛根素通过调控miR-490/Denticleless E3泛素蛋白连接酶抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移]。
摘要来源：中国医学科学院学报。 2022 年 2 月；44(1):91-101。 PMID：35300770
摘要作者：张雨新、张珍珍、赵立刚、赵琳琳
文章所属单位：张玉新
摘要：目的探讨葛根素抑制非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制。方法培养A549细胞，用不同浓度葛根素处理，CCK-8检测细胞增殖抑制率（IR），qRT-PCR检测miR-490和无齿E3泛素蛋白连接酶的mRNA水平(DTL)。采用双荧光素酶报告基因测定来鉴定目标f miR-490和DTL的基础上建立NC模拟组、miR-490模拟组、NC抑制剂组和miR-490抑制剂组。将20μmol/L葛根素处理的细胞分为六组：DMSO、葛根素、葛根素+NC抑制剂、葛根素+miR-490抑制剂、葛根素+miR-490抑制剂+Si-NC、葛根素+miR-490抑制剂+Si-DTL。Transwell检测细胞迁移和侵袭。Western blotting检测上皮间质转化相关标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白水平。结果随着葛根素浓度的增加,IR逐渐升高(=105.375,<0.001),miR-490表达逐渐升高(=32.919,<0.001),DTL表达逐渐降低(=116.120,<0.001)。与NC比较模拟组、miR-490模拟组荧光素酶活性降低(=7.762,=0.016),miR-490 mRNA水平升高(=13.319,<0.001),DTL mRNA水平下降(=7.415,=0.002)。与NC抑制剂组相比,miR-490表现出明显的降低。miR-490抑制剂组mRNA水平升高（=9.523，=0.001），DTL mRNA水平升高（=11.305，<0.001）。Western blotting显示NC模拟组DTL蛋白水平较高（=7.953，= 0.001) 高于 miR-490 模拟物组，且 miR-490 抑制剂组高于 NC 抑制剂组(=10.552,<0.001)。与DMSO组比较,葛根素组miR-490 mRNA水平上调(=10.255,=0.001),DTL mRNA水平下调(=6.682,=0.003)。葛根素+NC抑制剂组miR-490 mRNA水平下降葛根素+miR-490抑制剂组DTL升高(=10.995,<0.001),DTL升高(=12.478,<0.001)。葛根素+miR-490抑制剂+Si-NC组miR-490 mRNA水平无显着性差异组和葛根素+miR-490抑制剂+Si-DTL组(=1.081,=0.341),后者DTL蛋白含量较低(=14.321,<0.001)。葛根素+miR-490抑制剂组DTL蛋白水平高于葛根素+NC抑制剂组(= 11.423,<0.001),葛根素+miR-490抑制剂+Si-DTL组低于葛根素+miR-490抑制剂+Si-NC组(=12.080,<0.001)。与DMSO组相比,葛根素组表现抑制细胞增殖(=129.27,<0.001)。细胞增殖活性较高葛根素+miR-490抑制剂组高于葛根素+NC抑制剂组（=75.12，<0.001），且葛根素+miR-490抑制剂+Si-NC组高于葛根素+miR-490抑制剂+Si-DTL组（ =52.59,<0.001).与DMSO组相比,葛根素组抑制细胞迁移(=8.963,=0.001)。葛根素+miR-490抑制剂组细胞迁移能力高于葛根素+NC抑制剂组(=12.117,<0.001),且葛根素+miR-490抑制剂+Si-NC组细胞迁移能力高于葛根素+miR-490抑制剂+Si-NC组与葛根素+miR-490抑制剂+Si-DTL组相比(=12.934，<0.001)。与DMSO组(=4.710，=0.009)相比，葛根素组细胞侵袭能力减弱。葛根素+miR-490抑制剂组细胞侵袭能力高于葛根素+NC抑制剂组。r组（=13.264，<0.001），葛根素+miR-490抑制剂+Si-DTL组低于葛根素+miR-490抑制剂+Si-NC组（=13.476，<0.001）。与DMSO组相比，葛根素组显示 E-cadherin 蛋白水平上调 (=7.137,=0.002)，同时下调N-cadherin(=8.828,=0.001)和vimentin(=6.594,=0.003)蛋白水平升高。与葛根素+NC抑制剂组相比,E-cadherin(=12.376,<0.001)蛋白水平降低,而葛根素+NC抑制剂组的蛋白水平降低。 N-钙粘蛋白 (=13.436,<0.001) 和波形蛋白(=11.467,<0.001)葛根素+miR-490抑制剂组升高。与葛根素+miR-490抑制剂+Si-NC组相比,葛根素+miR-490抑制剂+Si-DTL组E蛋白水平上调-cadherin (=13.081,<0.001)，同时下调 N-cadherin 的蛋白水平(=10.835，<0.001)和波形蛋白(=11.862，<0.001)。结论葛根素可能通过上调miR-490、下调DTL抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。